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標(biāo)題: 固相多肽合成儀使用方法 [打印本頁(yè)]
作者: xiaobaba    時(shí)間: 2025-11-21 11:49
標(biāo)題: 固相多肽合成儀使用方法
　　PurePep? Sonata? +固相多肽合成儀使用方法如下：
　　一、固相多肽合成儀操作前準(zhǔn)備
　　1.安裝與校準(zhǔn)：
　　選擇干燥、清潔、溫度和濕度適宜的場(chǎng)所安裝儀器，確保安裝位置平穩(wěn)，避免運(yùn)行時(shí)晃動(dòng)。
　　核對(duì)電源規(guī)格，確保電壓和頻率與儀器要求匹配。
　　儀器首次使用或長(zhǎng)時(shí)間未使用后重新啟用時(shí)，需進(jìn)行校準(zhǔn)，特別是實(shí)時(shí)流量監(jiān)測(cè)技術(shù)相關(guān)組件，以保障液體傳輸?shù)木_性。
　　2.材料準(zhǔn)備：
　　根據(jù)目標(biāo)多肽序列和性質(zhì)，選擇合適的樹(shù)脂（如Rink Amide樹(shù)脂、Wang樹(shù)脂等）和保護(hù)基（如Fmoc保護(hù)基、側(cè)鏈保護(hù)基等）。
　　準(zhǔn)備合成所需的氨基酸、活化試劑、溶劑等，確保所有材料新鮮且純凈，避免雜質(zhì)引入。
　　提前配置好裂解液等試劑，并妥善保存。
　　3.軟件設(shè)置：
　　打開(kāi)PurePep Sonata+軟件，該軟件設(shè)計(jì)符合21 CFR Part 11要求，具備用戶管理、電子簽名、審計(jì)追蹤等功能。
　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇預(yù)設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案作為模板，或自定義設(shè)置合成方法。可以輕松導(dǎo)入序列以避免錯(cuò)誤，并設(shè)置合成規(guī)模、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間等參數(shù)。
　　軟件允許在當(dāng)前合成運(yùn)行的同時(shí)編程新的合成任務(wù)，提高生產(chǎn)效率。
　　二、合成操作
　　1.樹(shù)脂處理：
　　將樹(shù)脂加入固相合成儀的反應(yīng)釜中，用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ鏒CM）溶脹樹(shù)脂，然后抽干。
　　使用DMF等溶劑洗滌樹(shù)脂，以去除雜質(zhì)，洗滌結(jié)束后抽干備用。
　　2.縮合反應(yīng)：
　　將第一個(gè)氨基酸（通常從C端開(kāi)始）用一定體積的DMF溶解，并加入縮合劑（如HCTU、DIC/Oxyma等）進(jìn)行活化。
　　將活化后的氨基酸溶液投入固相合成儀中，補(bǔ)充DMF至適當(dāng)反應(yīng)濃度。
　　啟動(dòng)合成程序，開(kāi)始縮合反應(yīng)。反應(yīng)過(guò)程中，儀器會(huì)自動(dòng)監(jiān)測(cè)反應(yīng)溫度、壓力等參數(shù)，確保合成過(guò)程的控制和安全。
　　PurePep Sonata+具有多種混合模式，包括氮?dú)夤呐荨⒆兯僬袷幒驮傺h(huán)三種混勻方式，可單獨(dú)使用或組合使用，以最大限度提高反應(yīng)效率。
　　3.脫除保護(hù)基：
　　縮合反應(yīng)結(jié)束后，抽干溶劑。
　　使用適當(dāng)?shù)膲A性溶液（如PIP/DMF溶液）脫除氨基酸N端的保護(hù)基（如Fmoc基團(tuán)）。
　　再次抽干溶劑并用DMF洗滌樹(shù)脂，準(zhǔn)備加入下一個(gè)氨基酸。
　　4.重復(fù)縮合循環(huán)：
　　按照樹(shù)脂上預(yù)設(shè)的氨基酸序列，依次重復(fù)上述“脫保護(hù)→洗滌→活化氨基酸→投料→縮合→洗滌”的步驟，進(jìn)行縮合循環(huán)操作，直至完成所有氨基酸的連接。
　　三、合成后處理
　　1.樹(shù)脂裂解：
　　合成結(jié)束后，用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ鏘PA和DCM）交叉洗滌樹(shù)脂，完成樹(shù)脂的收縮。
　　將肽樹(shù)脂加入反應(yīng)釜中，加入預(yù)冷的裂解液（通常包含TFA等強(qiáng)酸），攪拌反應(yīng)以將多肽從樹(shù)脂上裂解下來(lái)。
　　裂解結(jié)束后放出反應(yīng)液，抽濾除去樹(shù)脂并以TFA等溶劑洗滌。
　　2.多肽純化：
　　將裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中室溫濃縮至小體積。
　　使用適當(dāng)?shù)某恋韯ㄈ缂谆宥』眩┦苟嚯奈龀?，并通過(guò)離心、洗滌等步驟得到粗肽。
　　使用高效液相色譜（HPLC）等方法對(duì)粗肽進(jìn)行純化，以去除雜質(zhì)并分離出目標(biāo)多肽。
　　3.濃縮、過(guò)濾與凍干：
　　將純化后的多肽溶液旋蒸除去有機(jī)溶劑，得到濃縮的多肽溶液。
　　對(duì)濃縮后的多肽溶液進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。
　　將過(guò)濾后的多肽溶液置于凍干機(jī)中，設(shè)定適當(dāng)?shù)纳郎爻绦蜻M(jìn)行凍干處理。
　　四、固相多肽合成儀使用注意事項(xiàng)
　　1.安全防護(hù)：
　　在操作過(guò)程中，應(yīng)佩戴防護(hù)手套、護(hù)目鏡等個(gè)人防護(hù)裝備，以防接觸合成過(guò)程中的化學(xué)試劑。
　　2.異常處理：
　　密切關(guān)注合成儀的顯示屏和報(bào)警系統(tǒng)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理任何異常情況。
　　當(dāng)儀器出現(xiàn)故障或異常時(shí)，不要試圖自行拆解修理，應(yīng)及時(shí)聯(lián)系售后人員。
　　3.清潔與維護(hù)：
　　合成結(jié)束后，及時(shí)清理儀器內(nèi)部和外部，包括反應(yīng)釜、管道、進(jìn)樣和反應(yīng)容器等，防止殘留試劑腐蝕儀器或殘留樣品影響下次合成。
　　定期對(duì)儀器進(jìn)行全面維護(hù)保養(yǎng)，如更換磨損部件、校準(zhǔn)傳感器等，確保儀器始終保持良好運(yùn)行狀態(tài)。
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作者: 手打檸檬茶    時(shí)間: 5 天前
這個(gè)討論讓我對(duì)這個(gè)行業(yè)有了更多的思考。



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