測(cè)dna濃度的儀器叫什么

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發(fā)表于 2025-4-2 15:07:39 | 只看該作者 |倒序?yàn)g覽 |閱讀模式

測(cè)量DNA濃度的儀器主要有以下幾種：
紫外分光光度計(jì)
原理：基于朗伯-比爾定律，利用DNA在260nm處（紫外線波長(zhǎng)）有最大吸收峰的特性，通過測(cè)定樣品在260nm處的吸光值來計(jì)算DNA濃度。同時(shí)，還會(huì)測(cè)定280nm處的吸光值，用于評(píng)估DNA的純度。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)等雜質(zhì)在280nm處也有吸收峰，通過A260/A280比值可以判斷DNA是否受到蛋白質(zhì)污染。一般來說，純凈的DNA樣品，A260/A280比值應(yīng)為1.8左右；若比值小于1.8，說明樣品可能含有較多蛋白質(zhì)；若大于2.0，則可能存在RNA污染或提取過程中使用了某些試劑殘留。
特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、快速，不需要復(fù)雜的樣品預(yù)處理，能夠直接測(cè)定DNA溶液的濃度和純度。但是其靈敏度相對(duì)較低，對(duì)于低濃度的DNA樣本測(cè)量不夠準(zhǔn)確，且不能區(qū)分DNA和其他在260nm處有吸收的物質(zhì)，如RNA、游離核苷酸等。
應(yīng)用場(chǎng)景：適用于初步篩選和大量樣本的快速檢測(cè)，常用于基因克隆、PCR反應(yīng)體系配制前對(duì)模板DNA的定量，以及質(zhì)粒DNA提取后的濃度測(cè)定等。
NanoDrop（超微量分光光度計(jì)）
原理：與普通紫外分光光度計(jì)類似，也是利用DNA在特定波長(zhǎng)下的紫外吸收特性來測(cè)定濃度。但它采用了更先進(jìn)的光學(xué)系統(tǒng)和檢測(cè)技術(shù)，能夠在僅需1-2微升樣品的情況下，快速準(zhǔn)確地測(cè)量DNA濃度。
特點(diǎn)：具有高靈敏度、操作簡(jiǎn)便、測(cè)量速度快等優(yōu)點(diǎn)。它可以直接顯示測(cè)量結(jié)果，無需復(fù)雜的計(jì)算，并且可以同時(shí)測(cè)量多個(gè)樣品，提高了工作效率。不過，其測(cè)量結(jié)果可能會(huì)受到樣品中的雜質(zhì)、氣泡、溫度等因素的影響，需要在使用前對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和清潔，以確保測(cè)量的準(zhǔn)確性。
應(yīng)用場(chǎng)景：廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的日常研究工作，如PCR產(chǎn)物的定量、酶切產(chǎn)物的回收定量、核酸標(biāo)記效率的測(cè)定等，尤其適合對(duì)珍貴或少量樣本的精確定量。
Qubit熒光計(jì)
原理：基于熒光染料法，使用特定的熒光染料（如Qubit試劑盒中的染料）與DNA結(jié)合后，在特定激發(fā)光的照射下會(huì)發(fā)出熒光，熒光強(qiáng)度與DNA的量成正比。通過制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（將已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)品與熒光染料混合，測(cè)量其熒光強(qiáng)度，繪制出以DNA濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線），再測(cè)量待測(cè)DNA樣品與相同熒光染料混合后的熒光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)DNA的濃度。
特點(diǎn)：特異性強(qiáng)，能夠精準(zhǔn)地區(qū)分DNA與其他雜質(zhì)，只對(duì)DNA進(jìn)行定量，不受蛋白質(zhì)、RNA等的干擾。靈敏度高，可檢測(cè)到pg級(jí)別的DNA，對(duì)于低濃度的DNA樣本也能準(zhǔn)確測(cè)量。但是其操作相對(duì)復(fù)雜一些，需要使用配套的試劑盒和儀器，成本也相對(duì)較高。
應(yīng)用場(chǎng)景：常用于對(duì)DNA樣本質(zhì)量要求較高的實(shí)驗(yàn)，如下一代測(cè)序（NGS）文庫構(gòu)建前的DNA質(zhì)量控制、基因表達(dá)定量分析等，能夠更準(zhǔn)確地反映DNA樣本的真實(shí)濃度和質(zhì)量。

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