|
一、濕熱滅菌法（最常用） 原理：利用高溫高壓蒸汽的穿透力和熱效應，使微生物蛋白質變性、酶失活，從而達到滅菌目的。
適用場景：適用于大多數發(fā)酵罐（如機械攪拌通風發(fā)酵罐、氣升式發(fā)酵罐）及液體培養(yǎng)基的滅菌。
操作步驟： - 空罐滅菌（CIP清洗后）
- 關閉所有閥門，向發(fā)酵罐內通入蒸汽，使罐內溫度升至 121-130℃，壓力維持在 0.1-0.15 MPa。
- 保持該條件 20-30分鐘，確保罐體、管道、攪拌器等部件徹底滅菌。
- 滅菌后，通過排汽閥緩慢釋放壓力，避免罐內負壓損壞設備。
- 實罐滅菌（培養(yǎng)基滅菌）
- 進料：將配制好的培養(yǎng)基泵入發(fā)酵罐，注意避免泡沫產生。
- 升溫：開啟蒸汽閥門，使培養(yǎng)基溫度升至 121℃，壓力 0.1 MPa 左右。
- 保溫：維持溫度 121℃ 和壓力 0.1 MPa 持續(xù) 20-30分鐘（具體時間根據培養(yǎng)基體積和成分調整）。
- 降溫：滅菌結束后，通過夾套通入冷卻水或循環(huán)冷卻液，快速降溫至發(fā)酵所需溫度（如30-37℃）。
- 排汽：降溫過程中需間歇排汽，防止罐內形成負壓，同時避免蒸汽冷凝水稀釋培養(yǎng)基。
優(yōu)點：滅菌徹底、成本低、操作簡便。
缺點：高溫可能破壞培養(yǎng)基中熱敏性成分（如維生素、氨基酸），需通過補料或優(yōu)化配方解決。 二、干熱滅菌法原理：利用高溫干燥空氣的氧化作用，使微生物脫水、蛋白質變性。
適用場景：適用于發(fā)酵罐內耐高溫但不宜用濕熱滅菌的部件（如玻璃器皿、金屬工具）。
操作步驟： - 將待滅菌物品放入干熱滅菌箱，設置溫度 160-180℃，維持 2-3小時。
- 滅菌后，待箱內溫度降至 60℃ 以下再打開箱門，避免物品驟冷破裂。
優(yōu)點：對熱敏性物質破壞小，適用于干燥物品。
缺點：滅菌時間長、能耗高，不適用于液體培養(yǎng)基或大型發(fā)酵罐。 三、過濾除菌法原理：通過微孔濾膜（如0.22μm）截留微生物，實現無菌過濾。
適用場景：適用于熱敏性培養(yǎng)基成分（如血清、酶制劑）或空氣的滅菌。
操作步驟： - 液體過濾：將培養(yǎng)基通過無菌濾膜（如聚醚砜膜）過濾至已滅菌的發(fā)酵罐中。
- 空氣過濾：在發(fā)酵罐進氣口安裝無菌空氣過濾器（如燒結金屬濾芯），過濾壓縮空氣中的微生物。
優(yōu)點：避免高溫破壞熱敏性成分，適用于特定場景。
缺點：濾膜可能堵塞，需定期更換；無法殺滅濾膜表面的微生物，需配合其他滅菌方法使用。
| 
發(fā)表于 2025-7-24 08:38:27
