固相多肽合成儀使用方法

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　　PurePep? Sonata? +固相多肽合成儀使用方法如下：
　　一、固相多肽合成儀操作前準備
　　1.安裝與校準：
　　選擇干燥、清潔、溫度和濕度適宜的場所安裝儀器，確保安裝位置平穩(wěn)，避免運行時晃動。
　　核對電源規(guī)格，確保電壓和頻率與儀器要求匹配。
　　儀器首次使用或長時間未使用后重新啟用時，需進行校準，特別是實時流量監(jiān)測技術相關組件，以保障液體傳輸?shù)木_性。
　　2.材料準備：
　　根據目標多肽序列和性質，選擇合適的樹脂（如Rink Amide樹脂、Wang樹脂等）和保護基（如Fmoc保護基、側鏈保護基等）。
　　準備合成所需的氨基酸、活化試劑、溶劑等，確保所有材料新鮮且純凈，避免雜質引入。
　　提前配置好裂解液等試劑，并妥善保存。
　　3.軟件設置：
　　打開PurePep Sonata+軟件，該軟件設計符合21 CFR Part 11要求，具備用戶管理、電子簽名、審計追蹤等功能。
　　根據實驗需求，選擇預設的標準實驗方案作為模板，或自定義設置合成方法?？梢暂p松導入序列以避免錯誤，并設置合成規(guī)模、反應溫度、反應時間等參數(shù)。
　　軟件允許在當前合成運行的同時編程新的合成任務，提高生產效率。
　　二、合成操作
　　1.樹脂處理：
　　將樹脂加入固相合成儀的反應釜中，用適當?shù)娜軇ㄈ鏒CM）溶脹樹脂，然后抽干。
　　使用DMF等溶劑洗滌樹脂，以去除雜質，洗滌結束后抽干備用。
　　2.縮合反應：
　　將第一個氨基酸（通常從C端開始）用一定體積的DMF溶解，并加入縮合劑（如HCTU、DIC/Oxyma等）進行活化。
　　將活化后的氨基酸溶液投入固相合成儀中，補充DMF至適當反應濃度。
　　啟動合成程序，開始縮合反應。反應過程中，儀器會自動監(jiān)測反應溫度、壓力等參數(shù)，確保合成過程的控制和安全。
　　PurePep Sonata+具有多種混合模式，包括氮氣鼓泡、變速振蕩和再循環(huán)三種混勻方式，可單獨使用或組合使用，以最大限度提高反應效率。
　　3.脫除保護基：
　　縮合反應結束后，抽干溶劑。
　　使用適當?shù)膲A性溶液（如PIP/DMF溶液）脫除氨基酸N端的保護基（如Fmoc基團）。
　　再次抽干溶劑并用DMF洗滌樹脂，準備加入下一個氨基酸。
　　4.重復縮合循環(huán)：
　　按照樹脂上預設的氨基酸序列，依次重復上述“脫保護→洗滌→活化氨基酸→投料→縮合→洗滌”的步驟，進行縮合循環(huán)操作，直至完成所有氨基酸的連接。
　　三、合成后處理
　　1.樹脂裂解：
　　合成結束后，用適當?shù)娜軇ㄈ鏘PA和DCM）交叉洗滌樹脂，完成樹脂的收縮。
　　將肽樹脂加入反應釜中，加入預冷的裂解液（通常包含TFA等強酸），攪拌反應以將多肽從樹脂上裂解下來。
　　裂解結束后放出反應液，抽濾除去樹脂并以TFA等溶劑洗滌。
　　2.多肽純化：
　　將裂解液轉入旋轉蒸發(fā)儀中室溫濃縮至小體積。
　　使用適當?shù)某恋韯ㄈ缂谆宥』眩┦苟嚯奈龀?，并通過離心、洗滌等步驟得到粗肽。
　　使用高效液相色譜（HPLC）等方法對粗肽進行純化，以去除雜質并分離出目標多肽。
　　3.濃縮、過濾與凍干：
　　將純化后的多肽溶液旋蒸除去有機溶劑，得到濃縮的多肽溶液。
　　對濃縮后的多肽溶液進行無菌過濾。
　　將過濾后的多肽溶液置于凍干機中，設定適當?shù)纳郎爻绦蜻M行凍干處理。
　　四、固相多肽合成儀使用注意事項
　　1.安全防護：
　　在操作過程中，應佩戴防護手套、護目鏡等個人防護裝備，以防接觸合成過程中的化學試劑。
　　2.異常處理：
　　密切關注合成儀的顯示屏和報警系統(tǒng)，及時發(fā)現(xiàn)并處理任何異常情況。
　　當儀器出現(xiàn)故障或異常時，不要試圖自行拆解修理，應及時聯(lián)系售后人員。
　　3.清潔與維護：
　　合成結束后，及時清理儀器內部和外部，包括反應釜、管道、進樣和反應容器等，防止殘留試劑腐蝕儀器或殘留樣品影響下次合成。
　　定期對儀器進行全面維護保養(yǎng)，如更換磨損部件、校準傳感器等，確保儀器始終保持良好運行狀態(tài)。
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