流式細胞儀校準失敗的可能原因有哪些？

慧儀儀器

流式細胞儀校準失敗可能由多種因素導致，以下是一些?常見原因及對應解決方案，供排查參考：  
?一、校準微球問題  
?1.微球過期或儲存不當  
?現(xiàn)象：信號強度異?；驘o法識別。  
?解決：檢查微球有效期，確認是否避光、低溫（如4℃）保存，避免反復凍融。  
2?.微球濃度不當或污染  
?現(xiàn)象：數(shù)據(jù)點分散或背景噪聲高。  
?解決：按說明書稀釋微球，使用前渦旋混勻，并通過濾網(wǎng)（如40μm）去除聚集體。  
?3.微球類型不匹配  
?現(xiàn)象：校準參數(shù)與實驗需求不符（如熒光通道未覆蓋）。  
?解決：選擇與實驗染料匹配的微球（如多色校準需用多峰微球）。  
?二、儀器硬件問題  
1?.激光器不穩(wěn)定或未對準  
?現(xiàn)象：信號波動大或部分通道無信號。  
?解決：檢查激光功率是否正常，聯(lián)系工程師進行光路校準。  
?2.流動室（FlowCell）或噴嘴堵塞  
?現(xiàn)象：液流不穩(wěn)定，微球流速異常。  
?解決：參照儀器手冊清潔流動室，用去離子水或70%乙醇沖洗管路。  
?3.光電倍增管（PMT）電壓漂移  
?現(xiàn)象：信號強度與歷史數(shù)據(jù)偏差大。  
?解決：重置PMT電壓至默認值，重新優(yōu)化電壓參數(shù)。  
?三、軟件設置錯誤  
?1.校準參數(shù)設置錯誤  
?現(xiàn)象：軟件無法識別微球或補償矩陣錯誤。  
?解決：確認軟件中選擇的微球類型、通道匹配（如FITC對應FL1通道）。  
2?.閾值（Threshold）設置不合理  
?現(xiàn)象：微球信號被過濾或背景噪聲干擾。  
?解決：調(diào)整閾值至微球信號明顯高于背景（如FSC/SSC閾值）。  
?3.補償矩陣未重置  
?現(xiàn)象：多色校準中熒光滲漏干擾結果。  
?解決：校準前關閉補償，或使用單色微球單獨校準各通道。  
?四、操作流程問題  
?1.未充分混勻微球  
?現(xiàn)象：數(shù)據(jù)點分布不均。  
?解決：使用前渦旋振蕩微球30秒，避免靜置分層。  
?2.進樣速度過快或壓力不穩(wěn)  
?現(xiàn)象：液流中斷或微球通過速率異常。  
?解決：調(diào)整進樣速度至低速模式（如12μL/min），檢查鞘液壓力是否穩(wěn)定。  
?3.未執(zhí)行系統(tǒng)預熱  
?現(xiàn)象：儀器未達到穩(wěn)定狀態(tài)導致數(shù)據(jù)漂移。  
?解決：開機后預熱30分鐘，待激光和液流系統(tǒng)穩(wěn)定后再校準。  
?五、環(huán)境干擾  
?1.溫度或濕度波動  
?現(xiàn)象：儀器性能受環(huán)境變化影響。  
?解決：確保實驗室溫度恒定（如25℃±2℃），濕度低于60%。  
?2.電磁干擾  
?現(xiàn)象：信號噪聲高或基線不穩(wěn)定。  
?解決：遠離大型電器（如離心機、冰箱），檢查儀器接地是否良好。  
?六、校準失敗后的應急步驟  
?重啟儀器：關閉電源等待5分鐘后重啟，排除臨時軟件故障。  
?更換微球批次：排除微球質(zhì)量問題。  
?簡化校準流程：先單激光單通道校準，逐步擴展至多色。  
?聯(lián)系技術支持：若硬件問題（如激光故障）需專業(yè)維修。