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反式脂肪酸的檢測方法多樣,主要包括氣相色譜法、紅外光譜法、銀離子色譜法、氣相色譜質(zhì)譜法及毛細(xì)管電泳法,各方法原理、步驟及特點如下: - 氣相色譜法(GC):
- 原理:通過極性毛細(xì)管柱將順、反式脂肪酸分離并測定。GC法是我國國標(biāo)和AOCS標(biāo)準(zhǔn)中使用較多的方法,具有高靈敏度和高分離度的特點。
- 步驟:樣品經(jīng)過甲酯化處理后,使用長100m的氰丙基硅氧烷柱(如SP 2560或CP Sil 88)進(jìn)行分離,反式異構(gòu)體在順式異構(gòu)體前流出。
- 特點:適用于人工反式脂肪酸的檢測,近年來離子液體色譜柱(如SLB-IL111)的引入進(jìn)一步提高了分離效果。
- 紅外光譜法(IR):
- 原理:利用非共軛反式雙鍵在紅外966 cm?1處有最大吸收峰的特性進(jìn)行測定,峰面積與濃度呈線性關(guān)系。
- 步驟:將油脂中的脂肪酸進(jìn)行甲酯化處理后,在900-1050 cm?1波數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜分析。
- 特點:快速方便,適用于測定5%以上反式脂肪酸的油樣。衰減全反射傅里葉變換紅外光譜法(ATR-FTIR)及負(fù)二階導(dǎo)數(shù)法能解決共軛雙鍵、游離羧基和甘油羥基的干擾,測到含量<1%的反式脂肪酸。
- 銀離子色譜法(Ag+-TLC/Ag+-HPLC):
- 原理:Ag+對雙鍵的絡(luò)合強度隨雙鍵數(shù)而增強,隨鏈長而減弱,據(jù)此可分析脂肪酸的順、反異構(gòu)體。
- 步驟:Ag+-TLC將順、反式脂肪酸分離成不同譜帶,用溶劑萃取后再定量;Ag+-HPLC則直接用于順、反式不飽和脂肪酸的分離。
- 特點:適用于天然反式脂肪酸的檢測,尤其是乳脂中復(fù)雜的共軛反式脂肪酸成分。Ag+-HPLC相比Ag+-TLC具有更高的分離度和操作便捷性。
- 氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS):
- 原理:結(jié)合氣相色譜的分離能力和質(zhì)譜的定性能力,對反式脂肪酸進(jìn)行準(zhǔn)確測定。
- 步驟:樣品經(jīng)過甲酯化處理后,使用氣相色譜進(jìn)行分離,質(zhì)譜檢測器進(jìn)行定性定量分析。
- 特點:具有較寬的檢測范圍和較高的檢測水平,且不會降解目標(biāo)分析物。適用于復(fù)雜樣品中反式脂肪酸的檢測。
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