流式細胞儀原理

元械工坊

流式細胞儀主要由液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、分選系統(tǒng)（可選）和數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)五部分組成，工作流程如下：

• 樣本制備與懸浮
  • 將細胞或顆粒（如血細胞、腫瘤細胞、微生物）懸浮于液體介質(zhì)（如磷酸鹽緩沖液）中，形成單細胞懸液。
  • 若需分析特定標記物（如表面抗原、DNA），需用熒光染料或熒光標記抗體對樣本進行染色。
    
• 液流系統(tǒng)：單細胞排列
  • 鞘液（Sheath Fluid）：通過高壓泵將無細胞的緩沖液（鞘液）注入流動室，形成穩(wěn)定的層流。
  • 樣本液：細胞懸液從噴嘴中心注入，被鞘液包裹并壓縮，形成單細胞液柱（直徑約3-10μm）。
  • 作用：確保細胞逐個通過激光檢測區(qū)，避免重疊或聚集，提高分析精度。
    
• 光學(xué)系統(tǒng)：激光激發(fā)與信號產(chǎn)生
  • 激光器：通常采用氬離子激光（488nm，用于激發(fā)FITC、PE等熒光染料）或半導(dǎo)體激光（如633nm，用于激發(fā)APC）。
  • 細胞通過激光束：當單細胞經(jīng)過激光聚焦點時，發(fā)生以下相互作用：
    • 前向散射光（FSC）：與激光同軸方向的光散射，反映細胞大?。ù蠹毎⑸涓鼜姡?。
    • 側(cè)向散射光（SSC）：垂直于激光方向的光散射，反映細胞內(nèi)部復(fù)雜度（如顆粒多少、核質(zhì)比）。
    • 熒光信號：若細胞被熒光染料標記，激光激發(fā)后發(fā)射特定波長的熒光，被光電倍增管（PMT）或雪崩光電二極管（APD）檢測。
      
    
    
• 檢測系統(tǒng)：信號轉(zhuǎn)換與放大
  • 光電轉(zhuǎn)換：PMT將光信號轉(zhuǎn)換為電信號，其增益可調(diào)以適應(yīng)不同熒光強度。
  • 信號放大與數(shù)字化：電信號經(jīng)放大器處理后，由模數(shù)轉(zhuǎn)換器（ADC）轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號，形成數(shù)據(jù)脈沖。
  • 多參數(shù)檢測：現(xiàn)代流式細胞儀可同時檢測10-20種熒光信號，通過不同波長的濾光片分離。
    
• 分選系統(tǒng)（可選）：細胞分離
  • 電荷分選：對目標細胞施加正/負電荷，通過偏轉(zhuǎn)板將其導(dǎo)入特定收集管。
  • 微流控分選：利用微流體芯片精確控制細胞路徑，實現(xiàn)高純度分選（如用于單細胞測序）。
  • 應(yīng)用：分離特定細胞亞群（如CD4+ T細胞、干細胞）用于后續(xù)培養(yǎng)或分析。
    
  
  

九月十二日

這個帖子的內(nèi)容正是我需要的，非常感謝樓主的分享。

像真的一樣

樓主說得太對了！這些儀器使用中的細節(jié)太容易被忽略了～

酒菜禾子

這個話題真的很重要，值得深入討論。