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流式細(xì)胞儀主要由液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、分選系統(tǒng)（可選）和數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)五部分組成，工作流程如下： - 樣本制備與懸浮
- 將細(xì)胞或顆粒（如血細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、微生物）懸浮于液體介質(zhì)（如磷酸鹽緩沖液）中，形成單細(xì)胞懸液。
- 若需分析特定標(biāo)記物（如表面抗原、DNA），需用熒光染料或熒光標(biāo)記抗體對樣本進(jìn)行染色。
- 液流系統(tǒng)：單細(xì)胞排列
- 鞘液（Sheath Fluid）：通過高壓泵將無細(xì)胞的緩沖液（鞘液）注入流動室，形成穩(wěn)定的層流。
- 樣本液：細(xì)胞懸液從噴嘴中心注入，被鞘液包裹并壓縮，形成單細(xì)胞液柱（直徑約3-10μm）。
- 作用：確保細(xì)胞逐個通過激光檢測區(qū)，避免重疊或聚集，提高分析精度。
- 光學(xué)系統(tǒng)：激光激發(fā)與信號產(chǎn)生
- 激光器：通常采用氬離子激光（488nm，用于激發(fā)FITC、PE等熒光染料）或半導(dǎo)體激光（如633nm，用于激發(fā)APC）。
- 細(xì)胞通過激光束：當(dāng)單細(xì)胞經(jīng)過激光聚焦點(diǎn)時，發(fā)生以下相互作用：
- 前向散射光（FSC）：與激光同軸方向的光散射，反映細(xì)胞大?。ù蠹?xì)胞散射更強(qiáng)）。
- 側(cè)向散射光（SSC）：垂直于激光方向的光散射，反映細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜度（如顆粒多少、核質(zhì)比）。
- 熒光信號：若細(xì)胞被熒光染料標(biāo)記，激光激發(fā)后發(fā)射特定波長的熒光，被光電倍增管（PMT）或雪崩光電二極管（APD）檢測。
- 檢測系統(tǒng)：信號轉(zhuǎn)換與放大
- 光電轉(zhuǎn)換：PMT將光信號轉(zhuǎn)換為電信號，其增益可調(diào)以適應(yīng)不同熒光強(qiáng)度。
- 信號放大與數(shù)字化：電信號經(jīng)放大器處理后，由模數(shù)轉(zhuǎn)換器（ADC）轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號，形成數(shù)據(jù)脈沖。
- 多參數(shù)檢測：現(xiàn)代流式細(xì)胞儀可同時檢測10-20種熒光信號，通過不同波長的濾光片分離。
- 分選系統(tǒng)（可選）：細(xì)胞分離
- 電荷分選：對目標(biāo)細(xì)胞施加正/負(fù)電荷，通過偏轉(zhuǎn)板將其導(dǎo)入特定收集管。
- 微流控分選：利用微流體芯片精確控制細(xì)胞路徑，實(shí)現(xiàn)高純度分選（如用于單細(xì)胞測序）。
- 應(yīng)用：分離特定細(xì)胞亞群（如CD4+ T細(xì)胞、干細(xì)胞）用于后續(xù)培養(yǎng)或分析。
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發(fā)表于 2025-8-8 15:30:18
