流式細胞儀的原理和操作過程

9549872673

　　流式細胞儀的原理可以通過參數(shù)測量、樣品分選及數(shù)據(jù)處理等**方面進行分析，操作過程包括準備樣品、機器設置、數(shù)據(jù)獲取等。

　　原理詳解：

　　1. 參數(shù)測量：

　　流式細胞儀能夠同時進行多參數(shù)測量，這些信息主要來源于特異性熒光信號及非熒光散射信號。

　　當細胞或微粒通過激光照射的測量區(qū)時，儀器會捕捉散射光和熒光信號，這些信號提供有關細胞大小、形狀、內(nèi)部結(jié)構(gòu)以及表面標志表達的信息。

　　前向角散射光(FSC)通常與細胞大小相關，而側(cè)向散射光(SSC)則與細胞內(nèi)部復雜性相關，例如細胞內(nèi)顆粒的數(shù)量和類型。

　　熒光信號則通過特定波長的激光器激發(fā)標記在細胞上的熒光染料產(chǎn)生，并且通過光電倍增管(PMT)檢測和轉(zhuǎn)換這些信號為電信號。

　　通過對散射光與熒光信號的混合分析，研究人員可以得到單個細胞的詳盡特性，如免疫表型、活性狀態(tài)等。

　　2. 樣品分選及數(shù)據(jù)處理：

　　在分析的基礎上，流式細胞儀還可以根據(jù)預設的參量范圍對特定細胞亞群進行分選。

　　分選過程中，通過電荷吸引的方式將含有目的細胞的液滴導向收集容器，實現(xiàn)特定細胞的分離。

　　數(shù)據(jù)分析通常涉及多種算法和可視化技術，以突出顯示細胞群體間的微妙差異，并可進行后續(xù)的詳細研究或培養(yǎng)。

　　操作過程：

　　1.準備樣品：

　　確保所有待測樣本是單細胞懸液，對于貼壁細胞或組織樣本，需要事先處理成適合儀器讀取的格式。

　　2.機器設置：

　　調(diào)整儀器設置，包括激光強度、光電倍增管電壓和濾鏡組合，以確保最佳信號采集。

　　使用對照樣品(未染色的細胞或標記有已知量熒光染料的細胞)來優(yōu)化儀器參數(shù)，確保實驗的準確性。

　　3.數(shù)據(jù)獲?。?br />
　　上樣并開始數(shù)據(jù)獲取，實時監(jiān)控數(shù)據(jù)質(zhì)量，必要時進行調(diào)整以保證數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。

　　4.數(shù)據(jù)分析：

　　采用專業(yè)軟件對獲取的數(shù)據(jù)進行分析，包括細胞群體的設門(Gating)和多參數(shù)分析。

　　5.結(jié)果驗證與保存：

　　對分析結(jié)果進行驗證，確保與預期實驗目標一致，并將重要數(shù)據(jù)妥善保存，為發(fā)表研究成果或進一步研究提供依據(jù)。

八月二十七日

這么專業(yè)的分析，真是大開眼界。

榴蓮小甜心

我覺得我們可以從不同角度看待這個問題，也許會有新發(fā)現(xiàn)。

鐵皮火車不停開

你的帖子很有幫助，我們將認真對待這些信息。期待你更多的分享。