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膠柱是正相還是反相

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發(fā)表于 2024-10-18 09:53:32 | 只看該作者 |倒序瀏覽 |閱讀模式
膠柱(通常指的是凝膠滲透色譜柱或凝膠過濾色譜柱,Gel Permeation Chromatography, GPC 或 Gel Filtration Chromatography, GFC)主要用于分離大分子物質(zhì),如聚合物、蛋白質(zhì)、多糖等。膠柱的分離機制與正相色譜和反相色譜不同,它主要是基于分子大小的分離,而不是基于極性或疏水性的分離。
凝膠滲透色譜(GPC)/凝膠過濾色譜(GFC)的分離機制
分離原理:
分子篩效應(yīng):膠柱中的填料是由多孔凝膠顆粒組成的。這些凝膠顆粒的孔徑大小是固定的,不同大小的分子在通過這些孔隙時會有不同的行為。
大分子:大分子無法進入凝膠顆粒的孔隙,因此會首先流出柱子。
小分子:小分子可以進入凝膠顆粒的孔隙,因此會花費更多時間在柱子中停留,最后流出柱子。
中等分子:中等大小的分子部分進入孔隙,部分在柱外流動,因此流出時間介于大分子和小分子之間。
填料材料:
常用填料:包括交聯(lián)葡聚糖(Sephadex)、聚丙烯酰胺(Porous Polystyrene-Divinylbenzene, PS-DVB)、硅膠基質(zhì)等。
孔徑大小:填料的孔徑大小決定了可以分離的分子大小范圍。
正相色譜 vs 反相色譜
正相色譜:
固定相:極性固定相,如硅膠、氨基硅烷、氰基硅烷等。
流動相:非極性或弱極性溶劑,如正己烷、環(huán)己烷等。
分離機制:基于樣品組分的極性差異,極性組分與固定相的相互作用較強,保留時間較長。
反相色譜:
固定相:非極性固定相,如C18、C8等。
流動相:極性溶劑,如水、甲醇、乙腈等。
分離機制:基于樣品組分的疏水性差異,疏水性組分與固定相的相互作用較強,保留時間較長。
膠柱與正相/反相色譜的對比
分離機制:膠柱基于分子大小的分離,而正相和反相色譜基于極性或疏水性的分離。
應(yīng)用范圍:膠柱主要用于大分子物質(zhì)的分離,如聚合物、蛋白質(zhì)、多糖等;正相和反相色譜主要用于小分子物質(zhì)的分離,如藥物、有機化合物等。
總結(jié)
膠柱(GPC/GFC)既不是正相色譜柱,也不是反相色譜柱。它是一種基于分子大小分離的色譜柱,適用于大分子物質(zhì)的分離。正相色譜和反相色譜則是基于極性或疏水性分離的色譜技術(shù),適用于小分子物質(zhì)的分離。
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    發(fā)表于 2024-10-28 16:33:42 | 只看該作者
    非常感謝,你的分享讓我對這個問題有了更深入的理解。
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    發(fā)表于 2024-11-23 00:17:53 | 只看該作者
    感謝大家的分享,讓我對這個問題有了更全面的認(rèn)識。
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